CKR-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407896

Übersicht

CCR10 kodiert den Chemokinrezeptor CKR-10, einen siebenfach transmembranären GPCR, der an die Liganden CCL27 und CCL28 bindet, um die Chemotaxis von Leukozyten und ihr gewebespezifisches Homing zu steuern. Die CKR-10-Signalübertragung rekrutiert heterotrimere G‑Proteine und reguliert dadurch den Kalziumfluss, MAPK- und PI3K-abhängige Signalwege, die Integrinaktivierung sowie die Umgestaltung des Zytoskeletts, die zusammen die Zellmigration und -positionierung an epithelialen Barrieren prägen. Dieser Rezeptor ist an der Immunüberwachung und an entzündlichen Trafficking-Programmen in Haut- und Schleimhautgeweben beteiligt, wobei eine veränderte CCR10-Aktivität die lokale Zusammensetzung von Immunzellen verschieben kann. Fehlregulierte, CCR10-assoziierte Chemokin-Netzwerke wurden im Kontext chronischer Entzündungen und der Biologie des Tumormikromilieus untersucht, was seine Relevanz als mechanistischer Knotenpunkt für migrationsorientierte Forschung unterstreicht.

Das CKR-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCR10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCR10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCR10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CKR-10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCR10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CKR-10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCR10-Exone abzielen, die für die CKR-10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCR10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CKR-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CKR-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCR10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CKR-10 HDR-Plasmid (h) und CKR-10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCR10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCR10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.