Plasmide Double Nickase (h) choactase: sc-401333-NIC

Le gène humain **CHAT** code la choline acétyltransférase, l’enzyme qui catalyse la biosynthèse de l’acétylcholine à partir de la choline et de l’acétyl‑CoA, soutenant la neurotransmission cholinergique dans les systèmes nerveux central et périphérique. L’activité de CHAT relie le métabolisme cellulaire de l’acétyl‑CoA au chargement des vésicules synaptiques et à la libération régulée des neurotransmetteurs, influençant l’excitabilité neuronale et la signalisation neuromusculaire. Des altérations du tonus cholinergique et une dérégulation de CHAT ont été étudiées dans la neurodégénérescence, les troubles cognitifs, ainsi que dans les affections des motoneurones et les maladies neuromusculaires, où la disponibilité de l’acétylcholine façonne le fonctionnement et la plasticité des circuits. En tant que marqueur de l’identité cholinergique, CHAT est largement utilisé pour explorer les programmes de différenciation, la physiologie synaptique et la régulation des voies des neurotransmetteurs.

choactase Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CHAT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CHAT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CHAT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CHAT.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.