Partículas Lentivirales de Activación (h) CHD7: sc-404017-LAC

CHD7 codifica la proteína 7 de unión al ADN con helicasa de cromodominio (chromodomain helicase DNA-binding protein 7), un remodelador de cromatina dependiente de ATP que reconoce marcas de histonas y regula el posicionamiento de los nucleosomas para controlar programas de transcripción durante el desarrollo y la especificación de linajes. Integra la señalización epigenética con la accesibilidad de potenciadores y promotores, influyendo en procesos como el desarrollo de la cresta neural, la neurogénesis y la morfogénesis de órganos mediante una modulación amplia de redes de expresión génica. La actividad de CHD7 se solapa con vías que gobiernan la organización de la cromatina, la transcripción mediada por la ARN polimerasa II y las decisiones de destino celular. La disfunción de CHD7 se asocia con trastornos del desarrollo, incluido el síndrome de CHARGE, y se estudia en el contexto de fenotipos neurodelimentales y congénitos.

Las partículas de activación lentiviral CHD7 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de CHD7 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral CHD7 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción CHD7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de CHD7. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo CHD7 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.