CHD7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404017-ACT

CHD7 (proteína 7 de ligação ao DNA com helicase de cromodomínio) é um remodelador de cromatina dependente de ATP que interpreta marcas de histonas por meio de seus cromodomínios para regular a acessibilidade de enhancers e promotores. Em células humanas, o CHD7 coordena programas transcricionais que moldam a especificação de linhagens, o desenvolvimento da crista neural e a organogênese, modulando o posicionamento de nucleossomos e a arquitetura da cromatina de ordem superior. A função do CHD7 intersecciona vias centrais de regulação epigenética e transcricional, influenciando a expressão gênica dirigida pela RNA polimerase II e as transições do estado da cromatina durante a diferenciação. A interrupção genética ou a alteração de dosagem de CHD7 está associada a fenótipos de transtornos do desenvolvimento, incluindo a síndrome CHARGE, e sua desregulação é investigada em redes transcricionais relacionadas ao neurodesenvolvimento e ao câncer.

CHD7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CHD7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CHD7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CHD7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CHD7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CHD7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CHD7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CHD7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CHD7 em células tumorais com expressão de CHD7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.