CETP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405829-ACT

Humanes CETP (Cholesterinester-Transferprotein) ist ein sezerniertes Plasmaglykoprotein, das den Transfer von Cholesterinestern und Triglyzeriden zwischen HDL und apoB-haltigen Lipoproteinen vermittelt und damit das Lipoprotein-Remodeling sowie den reversen Cholesterintransport prägt. Durch die Regulation der HDL-C-Verteilung und des Lipidflusses beeinflusst CETP Signal- und Stoffwechselwege, die die Lipidhomöostase, die Zusammensetzung von Lipoproteinpartikeln und die hepatobiliäre Clearance von Cholesterin steuern. Eine veränderte CETP-Aktivität oder -Expression wurde mit Dyslipidämie-Phänotypen sowie mit Unterschieden im Risiko für kardiovaskuläre und metabolische Erkrankungen in Verbindung gebracht, weshalb CETP ein häufig untersuchter Knotenpunkt in der Lipidstoffwechsel-Forschung ist.

CETP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CETP-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CETP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CETP-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CETP-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CETP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CETP-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CETP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CETP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CETP-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.