Plasmide Double Nickase (h) ceruloplasmin: sc-401798-NIC

Le gène humain **CP** code la céruloplasmine, une ferroxydase multicuprique qui oxyde le Fe²⁺ en Fe³⁺ afin de faciliter le chargement de la transferrine et de maintenir l’homéostasie du fer aux niveaux systémique et cellulaire. En tant que principale protéine plasmatique liant le cuivre, la céruloplasmine couple le transport du cuivre au contrôle rédox et limite la chimie pro‑oxydante du fer, susceptible d’amplifier la production d’espèces réactives de l’oxygène. L’activité de **CP** influence la capacité antioxydante extracellulaire et interagit avec les voies de trafic du fer dans les hépatocytes, les macrophages et les cellules du système nerveux central. Une expression ou une fonction altérée de la céruloplasmine est associée à une mauvaise distribution du fer et à des phénotypes de stress oxydant pertinents pour la neurodégénérescence, la dérégulation métabolique et les états inflammatoires.

ceruloplasmin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.