Plasmide CRISPR d'Activation (h) CEACAM6: sc-401852-ACT

CEACAM6 (molécule d’adhésion cellulaire 6 apparentée à l’antigène carcinoembryonnaire) est un membre de la superfamille des immunoglobulines ancré à la membrane via un GPI, exprimé dans les lignées épithéliales et myéloïdes, qui médie les interactions cellule–cellule et cellule–matrice. Il module la signalisation dépendante de l’adhésion via des voies associées aux intégrines, influençant la dynamique du cytosquelette, la polarité épithéliale et l’organisation de la barrière, et a été associé à la régulation de la résistance à l’anoïkis ainsi qu’au comportement invasif dans des contextes épithéliaux. CEACAM6 participe aux processus de l’immunité innée en façonnant les interactions à la surface cellulaire et la liaison aux microbes, avec des effets en aval sur les réseaux de signalisation inflammatoire. Une expression dérégulée de CEACAM6 est fréquemment observée dans les tumeurs solides et les troubles inflammatoires, ce qui en fait un levier moléculaire utile pour étudier la plasticité des cellules tumorales, les traits associés aux métastases et le dialogue avec le microenvironnement dans des systèmes modèles humains.

CEACAM6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEACAM6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CEACAM6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEACAM6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEACAM6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CEACAM6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEACAM6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CEACAM6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CEACAM6 dans les cellules tumorales présentant une expression de CEACAM6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.