CEACAM5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401219-ACT

CEACAM5 (carcinoembryonales Antigen-verwandtes Zelladhäsionsmolekül 5) ist ein über Glycosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Protein der Immunglobulin-Superfamilie, das auf der apikalen Oberfläche epithelialer Zellen exprimiert wird und dort zur Zell-Zell-Adhäsion sowie zur Aufrechterhaltung der Gewebearchitektur beiträgt. Über homophile und heterophile Interaktionen kann CEACAM5 die epitheliale Differenzierung, Polarität und kontaktabhängige Signalgebung beeinflussen, die mit adhäsionsabhängigen Signalwegen und dem Umbau der Zelloberflächen-Glykokalyx verknüpft ist. Eine dysregulierte CEACAM5-Expression ist häufig mit epithelialen Malignomen assoziiert und wird in Untersuchungen der Tumorzellbiologie – einschließlich Invasion, Metastasierung und Immuninteraktionen innerhalb der Tumormikroumgebung – breit als molekularer Marker eingesetzt. Seine Oberflächenlokalisation und die kontextabhängig variable Expression machen es zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Veränderungen epithelialer Zustände und onkogene Signalprogramme zu untersuchen.

CEACAM5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CEACAM5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CEACAM5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CEACAM5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CEACAM5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CEACAM5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CEACAM5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CEACAM5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CEACAM5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CEACAM5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.