CEACAM1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417666-ACT

CEACAM1 (carcinoembryonales Antigen-verwandtes Zelladhäsionsmolekül 1) ist ein humanes Zelloberflächen-Glykoprotein der Immunglobulin-Superfamilie, das homophile und heterophile Adhäsion vermittelt und über seine zytoplasmatischen ITIM-Motive die Signalübertragung reguliert. Es ist an der epithelialen Polarisation, der Organisation von Tight Junctions und der kontaktabhängigen Wachstumskontrolle beteiligt und moduliert zudem über SHP-abhängige Signalwege die Aktivierung von Immunzellen sowie Entzündungsreaktionen. CEACAM1 ist in Programme der Zell-Zell-Kommunikation eingebunden, die Migration, angiogenes Verhalten und Gewebeumbau beeinflussen, und verknüpft damit seinen Expressionsstatus mit Tumorbiologie und Immunregulation. Eine fehlregulierte CEACAM1-Expression wurde bei mehreren Krebsarten und in entzündlichen Kontexten beschrieben, was CEACAM1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für die Untersuchung von adhäsionsgekoppelter Signalübertragung und Interaktionen mit dem Mikromilieu macht.

CEACAM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CEACAM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CEACAM1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CEACAM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CEACAM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CEACAM1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CEACAM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CEACAM1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CEACAM1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CEACAM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.