Plásmido Doble Nickase (h) Cdt1: sc-401014-NIC

El gen humano **CDT1** codifica Cdt1, un factor esencial de licenciamiento de la replicación que carga la helicasa MCM2–7 sobre la cromatina durante la mitosis tardía y G1 para establecer complejos de pre-replicación y asegurar que la replicación del ADN ocurra una sola vez por ciclo celular. La actividad de Cdt1 está estrictamente controlada por fosforilación dependiente de CDK y por proteólisis mediada por ubiquitina a través de las vías SCF y CRL4–DDB1–Cdt2, integrando el licenciamiento de los orígenes de replicación con la señalización de checkpoints y el contexto de la cromatina. La expresión desregulada o la estabilización de CDT1 promueve la re-replicación, el estrés replicativo y respuestas al daño del ADN, vinculando a Cdt1 con fenotipos de inestabilidad genómica estudiados en biología del cáncer y otros trastornos proliferativos. Como nodo en el control de la entrada en fase S, Cdt1 se examina con frecuencia junto con geminina (GMNN), componentes de ORC y las vías ATR/CHK1 para analizar el tiempo de replicación y la progresión del ciclo celular.

Cdt1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDT1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDT1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDT1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDT1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.