Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdt1: sc-401014-ACT

El gen humano **CDT1** codifica **Cdt1**, un factor de licenciamiento de la replicación del ADN que carga la helicasa **MCM2–7** en los orígenes de replicación durante la mitosis tardía y la fase **G1** para asegurar una entrada oportuna en la fase **S**. La actividad de Cdt1 está estrictamente regulada por la fosforilación dependiente de **CDK**, la unión a **geminina** y la proteólisis mediada por ubiquitina a través de las vías **CRL4Cdt2** y **SCFSkp2**, con el fin de prevenir la rereplicación y preservar la estabilidad del genoma. La desregulación de **CDT1** puede impulsar estrés replicativo, activación aberrante de orígenes y señalización de daño en el ADN, procesos que con frecuencia se asocian a inestabilidad cromosómica en el cáncer y otros trastornos proliferativos. Como componente central de la red de licenciamiento de orígenes, Cdt1 se estudia ampliamente en el control del ciclo celular, las respuestas a puntos de control y la reparación del ADN acoplada a la replicación.

Cdt1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDT1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdt1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDT1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDT1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdt1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDT1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdt1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdt1 en células tumorales con expresión de CDT1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.