Cdk9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400242-ACT

Das humane Gen **CDK9** kodiert die Cyclin-abhängige Kinase 9 (Cdk9), die katalytische Untereinheit des positiven Transkriptionselongationsfaktors b (P-TEFb), der die C-terminale Domäne der RNA-Polymerase II phosphoryliert, um eine produktive Transkriptionselongation zu fördern. Durch die Regulation der Freisetzung aus der promotorproximalen Pause koordiniert Cdk9 die Expression unmittelbarer Frühgene, von Stressantwortprogrammen sowie von Regulatoren des Zellzyklus und des Überlebens und integriert Signale von transkriptionellen Koaktivatoren und chromatinassoziierten Faktoren. Die CDK9-Aktivität beeinflusst die RNA-Prozessierung und die Genomstabilität, indem sie transkriptionsgekoppelte Ereignisse prägt und die Kinetik der Genexpression steuert. Eine fehlregulierte CDK9/P-TEFb-Signalgebung ist häufig mit aberranten transkriptionellen Abhängigkeiten verbunden, die für die Krebsbiologie, inflammatorische Signalwege und die Virus-Wirt-Transkriptionskontrolle relevant sind, was CDK9 zu einem häufig genutzten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Transkription macht.

Cdk9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cdk9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cdk9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cdk9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cdk9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.