Plasmide Double Nickase (h) Cdk7: sc-400665-NIC

CDK7 code la kinase dépendante des cyclines 7 (Cdk7), un composant catalytique central du complexe kinase activatrice des CDK (CAK), qui phosphoryle et active plusieurs CDK du cycle cellulaire. Cdk7 fonctionne également au sein de TFIIH pour phosphoryler le domaine C-terminal de l’ARN polymérase II, reliant l’initiation de la transcription et l’échappement du promoteur aux programmes de maintien de l’intégrité du génome. Par ces rôles, CDK7 intègre la progression du cycle cellulaire, le contrôle transcriptionnel et la signalisation de la réponse aux dommages de l’ADN, influençant la prolifération et l’adaptation au stress. Une activité de CDK7 dérégulée et une dépendance à CDK7 ont été rapportées dans divers contextes cancéreux, ce qui en fait une cible utile pour étudier l’addiction transcriptionnelle, le contrôle des points de contrôle et les phénotypes de stress réplicatif dans les cellules humaines.

Cdk7 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.