Plásmido CRISPR de Activación (h) Cdk7: sc-400665-ACT

El CDK7 humano codifica la quinasa dependiente de ciclina 7 (Cdk7), una enzima de doble función que actúa como la quinasa activadora de CDK dentro del complejo CDK7–ciclina H–MAT1 y como componente central del factor general de transcripción TFIIH. Al fosforilar el dominio C-terminal de la ARN polimerasa II y activar las CDK del ciclo celular, Cdk7 coordina el inicio de la transcripción, la liberación de la pausa proximal al promotor y la progresión ordenada del ciclo celular. La actividad de CDK7 está estrechamente integrada con la señalización de la respuesta al daño del ADN y con la reparación por escisión de nucleótidos acoplada a la transcripción, vinculando el mantenimiento del genoma con las decisiones sobre el destino celular. La desregulación de programas transcripcionales dependientes de CDK7 y del control del ciclo celular se estudia con frecuencia en el contexto de estados proliferativos y redes de transcripción oncogénicas, lo que convierte a CDK7 en un nodo de alto valor para la investigación mecanística de vías.

Cdk7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDK7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdk7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDK7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDK7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdk7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDK7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdk7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdk7 en células tumorales con expresión de CDK7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.