Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Cdc20 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400583
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Cdc20 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Cdc20, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Cdc20 Anticuerpo (E-7): sc-13162
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Cdc20 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-400583 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
CDC20 codifica Cdc20, un coactivador esencial del complejo promotor de la anafase/ciclosoma (APC/C) que controla la transición de metafase a anafase al promover la degradación, dependiente de ubiquitina, de reguladores mitóticos clave. Su actividad está regulada por el punto de control del ensamblaje del huso mediante complejos inhibidores con proteínas como MAD2 y BUBR1, lo que garantiza una segregación cromosómica precisa y una salida oportuna de la mitosis. La desregulación de CDC20 altera la fidelidad de este punto de control, impulsa la inestabilidad cromosómica y la aneuploidía, y con frecuencia se asocia a fenotipos proliferativos en la biología del cáncer. Como nodo central en la gobernanza del ciclo celular, Cdc20 se estudia comúnmente en vías que implican la señalización de APC/C, la dinámica ubiquitina–proteasoma y el control del punto de control mitótico.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Cdc20 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen CDC20 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del CDC20 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de CDC20 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Cdc20.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en CDC20 para la investigación de la señalización de Cdc20, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de CDC20 críticos para la función de Cdc20
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de CDC20 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Cdc20 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Cdc20 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus CDC20. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Cdc20 (h) y el plásmido HDR Cdc20 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología CDC20 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana CDC20 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.