CD57 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402750-ACT

B3GAT1, das häufig mit dem CD57‑(HNK‑1‑)Kohlenhydrat-Epitop assoziiert ist, kodiert eine β‑1,3‑Glucuronyltransferase, die zur Biosynthese von HNK‑1‑Glykanstrukturen auf zelloberflächenständigen Glykoproteinen und Glykolipiden beiträgt. Dieses Glykosylierungsprogramm unterstützt Zell‑Zell‑Erkennung, Adhäsion und Signalübertragung in neuroentwicklungs- und immunologischen Kontexten und beeinflusst Prozesse wie Neuritenauswachsung, synaptische Organisation und Lymphozytendifferenzierung. CD57/HNK‑1‑assoziierte Glykane werden häufig als Marker reifer NK‑ und T‑Zell‑Subpopulationen verwendet und wurden mit veränderten Glykan‑Remodeling‑Prozessen bei neurologischen und inflammatorischen Phänotypen in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte B3GAT1‑abhängige Glykosylierung kann Interaktionen mit der extrazellulären Matrix sowie Rezeptor‑Signalwege stören, die von einer präzisen Glykanmusterung abhängen.

CD57 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen B3GAT1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD57 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des B3GAT1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der B3GAT1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD57-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native B3GAT1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD57-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD57-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem B3GAT1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.