Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CD55 Double Nickase Plasmid (h): sc-400738-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CD55 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CD55 Double-Nickase-Plasmid (h) und CD55 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CD55 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: CD55: sc-51733
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CD55 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400738-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CD55 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400738-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD55 (Decay-Accelerating Factor) ist ein GPI-verankertes, komplementregulatorisches Protein, das Wirtszellen vor komplementvermittelten Schäden schützt, indem es den Zerfall von C3/C5-Konvertasen beschleunigt. Durch die Begrenzung der Bildung nachgeschalteter Effektorkomplexe trägt CD55 zur Ausgestaltung der angeborenen Immunüberwachung bei und beeinflusst inflammatorische Signalwege an der Zelloberfläche und im Mikromilieu. Eine veränderte CD55-Expression oder -Funktion ist mit einer fehlregulierten Komplementaktivierung assoziiert und wurde unter anderem im Zusammenhang mit hämolytischen Erkrankungen, Autoimmunität und Mechanismen der Tumor-Immunflucht untersucht. In vitro wird CD55 häufig als Marker und funktioneller Knotenpunkt verwendet, um Komplementempfindlichkeit, Membranprotein-Trafficking und Interaktionen von Immunzellen zu untersuchen.
CD55 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CD55-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CD55 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CD55-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CD55-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.