CD55 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400738-ACT

CD55 (Decay-Accelerating Factor, DAF) ist ein glycosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankertes komplementregulatorisches Protein, das Wirtszellen vor komplementvermittelten Schäden schützt, indem es den Zerfall der C3/C5-Konvertasen beschleunigt. Durch die Begrenzung der Bildung nachgeschalteter entzündlicher und lytischer Komplementkomponenten trägt CD55 dazu bei, die angeborene Immun-Signalgebung an der Zelloberfläche zu steuern, und beeinflusst die Interaktionen von Immunzellen innerhalb von Gewebe-Mikroumgebungen. Eine veränderte CD55-Expression wurde mit dysregulierter Komplementaktivität und Phänotypen der Immunflucht in Zusammenhang gebracht, die bei entzündlichen Erkrankungen und in unterschiedlichen Tumorkontexten beobachtet werden. In humanen Zellmodellen bietet die Modulation von CD55 einen gut handhabbaren Ansatz, um Komplementkontrolle, Membranprotein-Trafficking und Signalwege der Immunerkennung zu untersuchen.

CD55 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD55-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD55 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD55-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD55-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD55-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD55-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD55-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD55-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD55-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.