CD46 Plasmide Double Nickase (h): sc-400968-NIC

CD46 (proteina cofattore di membrana) è una glicoproteina regolatrice del complemento espressa in modo ubiquo, che protegge le cellule dell’ospite dall’attacco del complemento autologo fungendo da cofattore per la scissione di C3b e C4b mediata dal fattore I, attenuando così l’amplificazione delle vie classica e alternativa. Attraverso i suoi ruoli alla superficie cellulare, CD46 modula la segnalazione dell’immunità innata, il tono infiammatorio e le interazioni cellula–cellula, ed è collegata a processi come l’attivazione dei leucociti e la biologia della barriera epiteliale. Alterazioni della funzione o dell’espressione di CD46 sono state associate a patofisiologia guidata dal complemento, inclusa la sindrome emolitico-uremica atipica e altre condizioni infiammatorie immuno-mediate. CD46 funge anche da recettore per alcuni patogeni selezionati, risultando rilevante per studi sulle interazioni ospite–microbo e sull’evasione immunitaria.

CD46 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CD46 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CD46. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CD46. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CD46 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.