CD40 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423444-ACT

O gene **Cd40** de camundongo codifica o **CD40**, uma molécula coestimuladora da superfamília de receptores de TNF expressa em células apresentadoras de antígeno, que coordena a imunidade adaptativa por meio de interações **CD40–CD40L**. A sinalização de CD40 ativa as vias de **NF-κB**, **MAPK** e **PI3K**, promovendo a maturação de células dendríticas, a proliferação de células B, a recombinação de troca de classe de imunoglobulinas e a formação de centros germinativos. Por meio de crosstalk com programas de citocinas e de receptores de reconhecimento de padrões, o CD40 molda o priming de células T e a polarização inflamatória. A atividade desregulada de CD40 está implicada em modelos de autoimunidade, inflamação crônica, biologia da rejeição a transplantes e regulação do microambiente imune tumoral, tornando-o um nó-chave para estudos de imunologia mecanística em sistemas murinos.

CD40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Cd40 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD40 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Cd40 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Cd40, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD40. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Cd40 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD40 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD40 em células tumorais com expressão de Cd40 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.