Plásmido CRISPR de Activación (h) CD39L4: sc-410720-ACT

El gen humano **ENTPD5** codifica **CD39L4**, una ectonucleósido trifosfato difosfohidrolasa localizada en el retículo endoplásmico que hidroliza **UDP** y **GDP** a monofosfatos, contribuyendo a la homeostasis de los azúcares nucleotídicos y al control de calidad de las glucoproteínas. Al mantener el ciclo de plegamiento dependiente de UDP-glucosa mediado por calnexina/calreticulina, CD39L4 influye en el procesamiento de proteínas en el RE, la **N-glicosilación** y los programas de proteostasis vinculados a la secreción y a la maduración de receptores de membrana. La actividad de ENTPD5 se cruza con la señalización de estrés del RE y con la reprogramación metabólica a través de sus efectos sobre la demanda de plegamiento proteico y el tráfico dependiente de glicanos. La expresión desregulada de ENTPD5 se ha asociado con fenotipos de glicosilación alterados y con vías relacionadas con la proliferación en biología del cáncer, lo que la hace relevante para estudios sobre la homeostasis del RE y las redes de señalización oncogénica.

CD39L4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ENTPD5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD39L4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ENTPD5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ENTPD5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD39L4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ENTPD5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD39L4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD39L4 en células tumorales con expresión de ENTPD5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.