CD33 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2): sc-419543-KO-2

Übersicht

Cd33 kodiert CD33, ein sialinsäurebindendes Immunglobulin-ähnliches Lektin (Siglec), das vor allem auf Zellen der myeloiden Linie exprimiert wird und dort als inhibitorischer Rezeptor wirkt, der die Aktivierung der angeborenen Immunantwort feinabstimmt. Über immunorezeptor-tyrosinbasierte inhibitorische Motive (ITIMs) kann CD33 Phosphatasen wie SHP-1/SHP-2 rekrutieren, um die Signalweiterleitung nachgeschaltet an Mustererkennungsrezeptoren und andere aktivierende Signale zu dämpfen und so Zytokinproduktion, Phagozytose und entzündliche Grundniveaus zu beeinflussen. In Mausmodellen wird Cd33 häufig genutzt, um regulatorische Schaltkreise von Mikroglia und Makrophagen zu untersuchen, einschließlich sialylierungsabhängiger „Selbst“-Erkennung und glykoimmunologischer Checkpoints. Veränderte CD33-Aktivität und -Expression werden mit fehlregulierten myeloiden Antworten bei Neuroinflammation und anderen immunvermittelten Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, was CD33 zu einem relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien der Immunhomöostase macht.

Das CD33 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Cd33-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Cd33-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Cd33 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CD33-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Cd33-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CD33-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Cd33-Exone abzielen, die für die CD33-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Cd33-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CD33 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom CD33 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Cd33-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CD33 HDR-Plasmid (m) und CD33 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Cd33-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Cd33-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.