CD20 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-416765-LAC

MS4A1 codifica o CD20, uma proteína de membrana tetraspânica altamente expressa em células da linhagem B, que regula o fluxo de cálcio e a sinalização dependente do recetor de células B (BCR). O CD20 contribui para a ativação, proliferação e diferenciação das células B através de vias que intersetam a sinalização PI3K–AKT, NF-κB e MAPK e modulam respostas induzidas por antigénios. A expressão alterada de MS4A1/CD20 está estreitamente associada à identidade da linhagem B e aos estados do microambiente imunitário, tornando-se uma característica molecular comum estudada em modelos de neoplasias de células B e de desregulação de células B associada a doenças autoimunes. Consequentemente, o MS4A1 constitui um nó útil para investigar os circuitos de sinalização das células B, as transições de linhagem e a heterogeneidade imunofenotípica em sistemas celulares humanos.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD20 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de MS4A1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais CD20 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição MS4A1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de CD20. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo MS4A1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.