Plasmide Double Nickase (h) CD1D: sc-402435-NIC

CD1D code pour CD1d, une molécule de présentation d’antigènes de type CMH de classe I non classique, qui lie des antigènes lipidiques d’origine endogène et microbienne et les expose à la surface cellulaire pour être reconnus par les cellules T invariantes Natural Killer (iNKT). Par les interactions CD1d–TCR, elle coordonne l’activation de ces lymphocytes T de type inné, la libération rapide de cytokines et le dialogue en aval avec les cellules dendritiques, les cellules NK et les lymphocytes T conventionnels, contribuant ainsi à la surveillance immunitaire et à la tolérance. La fonction de CD1D s’intègre aux processus de trafic endosomal, aux voies de chargement des lipides et à la présentation antigénique, qui influencent la signalisation inflammatoire et l’homéostasie immunitaire tissulaire. Une altération de la présentation d’antigènes lipidiques médiée par CD1d a été impliquée dans des dérégulations immunitaires pertinentes pour l’infection, l’immunologie tumorale et des affections auto-immunes ou inflammatoires, ce qui motive des études mécanistiques dans divers types cellulaires.

CD1D Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD1D.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.