CD1D CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402435-ACT

CD1D kodiert CD1d, ein nichtklassisches, MHC‑Klasse‑I‑ähnliches antigenpräsentierendes Molekül, das Lipid- und Glykolipidantigene bindet und an der Zelloberfläche zur Erkennung durch invariante natürliche Killer‑T‑Zellen (iNKT‑Zellen) präsentiert. Indem CD1d die Aktivierung von iNKT‑Zellen und nachgeschaltete Zytokinprogramme prägt, trägt es zur Immunüberwachung, Toleranz und Regulation von Entzündungen in verschiedenen Geweben bei. Die CD1d‑abhängige Präsentation von Lipidantigenen ist mit endosomaler Transportdynamik, Antigenprozessierung und Signalwegen angeboren‑ähnlicher Lymphozyten verknüpft, die die Tumorimmunologie, die Infektionsbiologie und chronische Entzündungszustände beeinflussen. Eine veränderte CD1D‑Expression oder ‑Funktion wurde mit fehlregulierten Immunantworten in Verbindung gebracht, wie sie bei Autoimmunität, metabolischer Entzündung und in Tumormikroumgebungen beobachtet werden.

CD1D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CD1D-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CD1D Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CD1D-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CD1D-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CD1D-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CD1D-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CD1D-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CD1D-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CD1D-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.