CD161 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405895

Panoramica

KLRB1 codifica CD161 (KLRB1), un recettore di tipo lectinico C (C-type lectin-like) espresso in modo marcato su sottopopolazioni di cellule NK e di cellule T, incluse le cellule T invarianti associate alla mucosa (MAIT) e popolazioni di tipo Th17. CD161 partecipa alla segnalazione immunoregolatoria e alla modulazione della citotossicità e della produzione di citochine tramite vie mediate dal recettore che modellano le risposte immunitarie innate e adattative. Un’espressione alterata di KLRB1/CD161 è associata a stati di attivazione immunitaria e a contesti infiammatori, ed è spesso utilizzata per fenotipizzare sottogruppi linfocitari funzionalmente distinti in studi su infezioni, autoimmunità e immunologia dei tumori. In quanto recettore di superficie collegato a programmi effettrici come risposte polarizzate verso IL-17 e l’homing tissutale, CD161 rappresenta un punto d’accesso pratico per analizzare la differenziazione e la funzione dei linfociti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD161 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KLRB1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KLRB1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KLRB1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD161.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KLRB1 per lo studio della segnalazione di CD161, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KLRB1 critici per la funzione di CD161
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KLRB1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD161 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal CD161 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KLRB1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD161 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR CD161 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KLRB1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KLRB1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.