CD151 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419532

Panoramica

Cd151 codifica CD151, una tetraspanina che organizza microdomini di membrana e modula l’adesione, la migrazione e la segnalazione dipendenti dalle integrine. CD151 si associa a integrine leganti la laminina come α3β1 e α6β1/β4, influenzando la dinamica delle adesioni focali, il rimodellamento del citoscheletro e vie a valle tra cui PI3K–AKT e MAPK. Nei sistemi murini, l’attività di CD151 contribuisce all’integrità epiteliale, al comportamento angiogenico e al traffico delle cellule immunitarie, collegandola a processi rilevanti per l’invasione tumorale, la fibrosi e il rimodellamento tissutale infiammatorio. Il suo ruolo nelle interazioni con la matrice extracellulare la rende anche un nodo utile per studiare l’organizzazione della membrana basale e la comunicazione cellula–cellula.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO CD151 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cd151 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cd151 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cd151 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina CD151.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cd151 per lo studio della segnalazione di CD151, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cd151 critici per la funzione di CD151
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cd151 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal CD151 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal CD151 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cd151. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal CD151 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR CD151 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cd151 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cd151 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.