CCZ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-417084

Übersicht

CCZ1B kodiert das Protein CCZ1, eine zentrale Komponente des Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor(GEF)-Komplexes CCZ1–MON1, der RAB7 aktiviert und so die Reifung später Endosomen sowie die Fusion von Endosomen und Lysosomen koordiniert. Über die Regulation des RAB7-abhängigen Membrantransports unterstützt CCZ1 die lysosomale Zustellung und den Abbau internalisierter Rezeptoren und Fracht und beeinflusst damit den Autophagie‑Lysosomen-Flux und die zelluläre Proteostase. Störungen dieses Signalwegs können die Homöostase von Organellen beeinträchtigen, die Herunterregulation von Signalrezeptoren verändern und die Reaktionen auf metabolischen sowie proteotoxischen Stress beeinflussen. Entsprechend ist CCZ1B für Studien zu Neurodegeneration, zur Anpassung von Krebszellen und zur Funktion von Immunzellen interessant, in denen endolysosomaler Transport und Autophagie häufig umgebaut werden.

Das CCZ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CCZ1B-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CCZ1B-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CCZ1B nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die CCZ1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CCZ1B-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der CCZ1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CCZ1B-Exone abzielen, die für die CCZ1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CCZ1B-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom CCZ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom CCZ1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CCZ1B-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das CCZ1 HDR-Plasmid (h) und CCZ1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CCZ1B-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CCZ1B-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.