Cbl CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400561-ACT

Humanes **CBL** kodiert **Cbl**, eine **E3-Ubiquitin-Ligase** und ein Adapterprotein, das aktivierte Rezeptor- und Nicht‑Rezeptor‑Tyrosinkinasen herunterreguliert, indem es Ubiquitinierung und endozytotischen Transport fördert. Über seine **TKB-** und **RING‑Finger‑Domänen** moduliert Cbl den Signalfluss in **EGFR-**, **PDGFR-** und Immunrezeptor-Signalwegen und prägt die Outputs von **MAPK/ERK**, **PI3K–AKT** und **JAK/STAT**, die Proliferation, Differenzierung und Zytokinantworten steuern. **CBL** integriert negative Rückkopplung in der Signalübertragung hämatopoetischer und immunologischer Zellen und trägt zur Regulation der Zytoskelettdynamik und Zellmigration bei. Eine Dysregulation von **CBL**, einschließlich veränderter Expression oder funktioneller Varianten, ist mit aberranter Tyrosinkinase-Signalgebung bei Malignomen und immunbezogenen Erkrankungen assoziiert und unterstützt seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Signalabschwächung.

Cbl Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CBL-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cbl Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CBL-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CBL-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cbl-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CBL-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cbl-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cbl-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CBL-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.