caveolin-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419480

Panoramica

Cav2 codifica la caveolina-2, un componente integrale di membrana delle caveole che coopera con la caveolina-1 nel modellare le invaginazioni della membrana plasmatica e nell’organizzare i microdomini delle lipid raft. La caveolina-2 influenza endocitosi e transcitosi, meccanotrasduzione e compartimentalizzazione del segnale per vie che coinvolgono recettori tirosin-chinasici, segnalazione eNOS/NO e rimodellamento del citoscheletro. Nei tessuti murini, l’espressione di Cav2 è marcata nelle cellule endoteliali, negli adipociti e in alcuni compartimenti epiteliali, dove contribuisce al traffico di membrana e all’omeostasi vascolare. Una biologia delle caveole deregolata è stata collegata a fenotipi cardiopolmonari e metabolici e a effetti dipendenti dal contesto sulla migrazione e proliferazione cellulare, rendendo Cav2 un bersaglio utile per studiare l’organizzazione della membrana in modelli rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO caveolin-2 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cav2 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cav2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cav2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina caveolin-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cav2 per lo studio della segnalazione di caveolin-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cav2 critici per la funzione di caveolin-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cav2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal caveolin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal caveolin-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cav2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal caveolin-2 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR caveolin-2 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cav2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cav2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.