Plasmide CRISPR d'Activation (m) cathepsin S: sc-419881-ACT

Le gène murin *Ctss* code la cathepsine S, une protéase cystéine lysosomale qui reste active à un pH proche de la neutralité et soutient le traitement des antigènes en dégradant la chaîne invariante afin de faciliter le chargement des peptides sur le CMH de classe II. Elle contribue au renouvellement des protéines dans le compartiment endolysosomal, au remodelage de la matrice extracellulaire et à la régulation des signaux inflammatoires dans les cellules présentatrices d’antigènes, notamment les macrophages et les cellules dendritiques. L’activité de *Ctss* s’inscrit à l’interface de voies immunitaires qui orientent l’activation de l’immunité adaptative et peut influencer le remodelage tissulaire au sein de microenvironnements inflammatoires. Une expression ou une activité dérégulée de la cathepsine S a été associée à des phénotypes auto-immuns et inflammatoires et est fréquemment étudiée dans des modèles de neuroinflammation, d’athérosclérose et d’immunité associée aux tumeurs.

cathepsin S Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Ctss sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

cathepsin S Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Ctss dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Ctss, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de cathepsin S. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Ctss natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de cathepsin S au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie cathepsin S dans les cellules tumorales présentant une expression de Ctss silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.