cathepsin G Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402663-ACT

CTSG codifica a catepsina G, uma protease serina de neutrófilos e monócitos armazenada em grânulos azurófilos e liberada durante a desgranulação para moldar respostas imunes inatas. A catepsina G contribui para a atividade antimicrobiana e para o remodelamento da matriz extracelular ao clivar uma variedade de substratos proteicos, conectando-se à sinalização inflamatória, à quimiotaxia de leucócitos e ao equilíbrio protease–antiprotease em ambientes mieloides. A atividade desregulada de CTSG tem sido associada a lesão tecidual impulsionada por neutrófilos e inflamação crônica, e padrões de expressão alterados são estudados em neoplasias mieloides e distúrbios imunomediados. Como componente de redes de proteases granulares, CTSG é frequentemente analisado juntamente com a elastase e a proteinase 3 em vias que regulam a defesa do hospedeiro, a inflamação vascular e as interações tumor–sistema imune.

cathepsin G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CTSG sem alterar a sequência de ADN subjacente.

cathepsin G O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CTSG em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CTSG, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de cathepsin G. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CTSG nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de cathepsin G no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via cathepsin G em células tumorais com expressão de CTSG silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.