CAT-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403628-ACT

Das humane Gen **SLC7A1** kodiert den kationischen Aminosäuretransporter 1 (**CAT-1**), einen hochaffinen Plasmamembran-Transporter, der die Aufnahme von **L-Arginin**, **L-Lysin** und **L-Ornithin** vermittelt. Durch die Regulation der intrazellulären Argininverfügbarkeit beeinflusst CAT-1 die **Stickstoffmonoxid-(NO)-Synthese**, die **Polyamin-Biosynthese** sowie umfassendere Programme der **Aminosäure-Signalwahrnehmung**, die Zellwachstum, Redox-Gleichgewicht und Immun-Signalgebung prägen. Die CAT-1-Aktivität greift in endotheliale und inflammatorische Signalwege ein, indem sie Substrate für die **NOS-abhängige Signalübertragung** und den Argininstoffwechsel bereitstellt. Eine dysregulierte SLC7A1-Expression oder Transportkapazität wurde mit **vaskulärer Dysfunktion**, **kardiometabolischen Phänotypen** und veränderten proliferativen Zuständen in Verbindung gebracht, was SLC7A1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Aminosäuretransport und Signalweg-Crosstalk macht.

CAT-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SLC7A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CAT-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SLC7A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SLC7A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CAT-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SLC7A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CAT-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CAT-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SLC7A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.