Plasmide Double Nickase (h) caspase-5: sc-401520-NIC

CASP5 code la caspase-5, une caspase inflammatoire qui contribue à la signalisation de l’immunité innée en favorisant la maturation protéolytique de cytokines pro-inflammatoires et l’exécution de la mort cellulaire pyroptotique. Elle agit au sein de voies liées à l’inflammasome et participe à la détection des produits microbiens et du stress cellulaire ainsi qu’à la réponse à ces signaux, influençant les programmes inflammatoires des cellules épithéliales et myéloïdes. Une activité dérégulée de la caspase-5 a été associée à une libération aberrante de cytokines et à des lésions tissulaires inflammatoires, ce qui fait de CASP5 un nœud utile pour étudier l’homéostasie immunitaire et les réseaux de signalisation inflammatoire. L’étude de CASP5 soutient les recherches mécanistiques sur l’activation de l’inflammasome, le processing des cytokines et les interactions (cross-talk) entre voies de mort cellulaire.

caspase-5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CASP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CASP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CASP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CASP5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.