CARD 9 CRISPR Activationプラスミド (m): sc-436080-ACT

マウスのCard9は、骨髄系細胞においてパターン認識受容体を下流の炎症性シグナル伝達につなぐ、細胞質アダプタータンパク質であるCARD9をコードする。CARD9はC型レクチン受容体経路の主要なメディエーターであり、サイトカイン産生、抗微生物応答、骨髄系細胞の分化状態を規定するNF-κBおよびMAPKプログラムの活性化に寄与する。自然免疫シグナル伝達におけるその役割を通じて、CARD9活性の変化は実験モデルにおいて宿主防御の破綻や炎症関連の表現型と関連しており、感染生物学や免疫恒常性の研究において重要である。そのためCard9は、マクロファージ、樹状細胞、好中球系細胞における受容体近傍のシグナル伝達の論理や転写出力を解析するために、しばしば用いられる。

CARD 9 CRISPR活性化プラスミド（m）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性Card9の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

CARD 9 CRISPR 活性化プラスミド (m) は、ヒト細胞株における Card9 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCard9転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性CARD 9の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCard9遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるCARD 9依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCard9発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるCARD 9経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。