Plásmido Doble Nickase (h) CaM II: sc-400952-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CaM II consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CaM II (h) y el plásmido de doble nickasa CaM II (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CALM2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CaM II | sc-400952-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CaM II | sc-400952-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **CALM2** codifica la calmodulina (CaM II), un sensor de Ca2+ expresado de forma ubicua que traduce señales transitorias de calcio en cambios coordinados en la actividad enzimática, la apertura y cierre de canales iónicos y los programas de transcripción. Al unirse a dianas y regularlas, como las CaMK, la calcineurina, las fosfodiesterasas y las sintasas de óxido nítrico, CALM2 contribuye al acoplamiento excitación–contracción, la plasticidad sináptica, el tráfico vesicular y el control del ciclo celular. La señalización dependiente de CALM2 se integra con las vías de quinasas dependientes de Ca2+/calmodulina, las cascadas MAPK y la remodelación del citoesqueleto para moldear respuestas celulares dependientes del estímulo. La desregulación de la señalización de la calmodulina y las variantes en genes de calmodulina se asocian con una excitabilidad eléctrica anómala y una homeostasis del Ca2+ alterada, lo que impulsa estudios mecanísticos en cardiomiocitos, neuronas y otros modelos de células excitables.
CaM II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CALM2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CALM2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CALM2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CALM2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.