calsyntenin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-425768

Übersicht

Clstn1 kodiert Calsyntenin-1, ein Typ-I-Membranprotein, das in Neuronen angereichert ist und als Cargo-Adaptor fungiert, der Vesikel mit Kinesin-Motoren koppelt und den anterograden Transport in Axonen und Dendriten koordiniert. Durch Interaktionen mit dem Amyloid-Vorläuferprotein (APP), synaptischen Komponenten und der endosomalen Transportmaschinerie trägt Calsyntenin-1 zur Synapsenbildung, zum Rezeptortransport und zur aktivitätsabhängigen neuronalen Konnektivität bei. Eine Störung des CLSTN1-abhängigen Transports und der synaptischen Homöostase wurde im Kontext neuroentwicklungsbedingter und neurodegenerativer Krankheitsmechanismen untersucht, einschließlich Signalwege, die an der Alzheimer-assoziierten APP-Verarbeitung beteiligt sind. In Mausmodellen wird Clstn1 häufig untersucht, um zu verstehen, wie intrazellulärer Ferntransport den Aufbau neuronaler Schaltkreise, synaptische Plastizität und neuronale Vulnerabilität beeinflusst.

Das calsyntenin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Clstn1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Clstn1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Clstn1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die calsyntenin-1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Clstn1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der calsyntenin-1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Clstn1-Exone abzielen, die für die calsyntenin-1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Clstn1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom calsyntenin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom calsyntenin-1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Clstn1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das calsyntenin-1 HDR-Plasmid (m) und calsyntenin-1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Clstn1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Clstn1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.