Plasmide CRISPR d'Activation (m) Calponin 1: sc-419719-ACT

Le gène murin Cnn1 code la calponine 1, une protéine se liant à l’actine, enrichie dans le muscle lisse différencié, où elle module le comportement contractile en régulant les interactions actine–myosine et l’organisation du cytosquelette. La calponine 1 participe au contrôle calcium-dépendant de la dynamique actomyosine et est associée à la signalisation RhoA/ROCK, au remodelage des adhérences focales et au basculement phénotypique entre états contractile et synthétique du muscle lisse. Les variations d’expression de CNN1 sont utilisées comme marqueurs de la différenciation du muscle lisse et du remodelage vasculaire, avec un intérêt pour des processus tels que l’hyperplasie néo-intimale, les programmes de myofibroblastes associés à la fibrose et les modifications de la biomécanique tissulaire. En tant que régulateur du cytosquelette, la calponine 1 constitue un nœud fonctionnel pour étudier la mécanotransduction, la migration et la signalisation induite par la matrice extracellulaire dans des modèles de muscle lisse vasculaire et des voies aériennes.

Calponin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Cnn1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Calponin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Cnn1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Cnn1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Calponin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Cnn1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Calponin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Calponin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Cnn1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.