Plasmide CRISPR/Cas9 KO CALM (m): sc-433276

Présentation

Picalm (phosphatidylinositol binding clathrin assembly protein) code pour CALM, un adaptateur cytosolique qui couple la liaison aux phosphoinositides à la formation des puits recouverts de clathrine et à la sélection des cargos lors de l’endocytose. CALM régule l’internalisation des récepteurs, le recyclage des vésicules synaptiques et le trafic des endosomes, influençant ainsi l’homéostasie membranaire et la dynamique des voies de signalisation en aval. Dans des systèmes murins, la perturbation de Picalm peut modifier les voies de transport intracellulaire et le flux autophagie–lysosome, des processus souvent étudiés dans des contextes neuronaux et hématopoïétiques. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé la biologie de PICALM/CALM à des défauts de trafic liés à la neurodégénérescence, ainsi qu’à une dérégulation des programmes de croissance cellulaire via une altération du renouvellement des récepteurs et du transport vésiculaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CALM (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Picalm dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Picalm, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Picalm à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CALM.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Picalm pour l'étude de la signalisation de CALM, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Picalm essentiels à la fonction de CALM
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Picalm pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CALM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CALM plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Picalm. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CALM plasmide HDR (m) et le CALM (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Picalm pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Picalm définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.