C9 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401198-ACT

Das humane Gen **C9** kodiert die Komplementkomponente 9, einen terminalen Effektor der Komplementkaskade, der im Membranangriffskomplex (MAC) polymerisiert, Zielmembranen perforiert und so lytische Gewebeschädigung begünstigt. Die C9-Funktion ist in die angeborene Immunantwort eingebunden, indem sie über Aktivierung des klassischen, des Lektin- und des alternativen Weges mit der Immun-Signalgebung verzahnt ist und dadurch Entzündung, Opsonisierung und Pathogenelimination mitprägt. Eine fehlregulierte Aktivität des terminalen Komplementwegs und MAC-Ablagerungen werden mit Gewebeschäden und chronischer Entzündung bei immunvermittelten und degenerativen Erkrankungen in Verbindung gebracht, was C9 als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung komplementgetriebener Pathologie stützt. Die experimentelle Modulation der C9-Expression ermöglicht es, zu analysieren, wie terminale Komplementaktivität zelluläre Stressantworten, Barriereintegrität sowie Interaktionen zwischen Immunzellen und Gewebe beeinflusst.

C9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C9 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C9-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C9-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C9-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.