Plásmido CRISPR de Activación (h) C4a: sc-402428-ACT

El gen humano C4A codifica el componente del complemento C4, un efector central de las vías clásica y de las lectinas del sistema del complemento, que amplifica la vigilancia inmunitaria mediante la opsonización y la propagación de señales inflamatorias. El procesamiento proteolítico de C4 contribuye a la generación de fragmentos de activación que coordinan interacciones con receptores del complemento y otros mediadores de la inmunidad innata, influyendo en la eliminación de complejos inmunes y restos celulares. Las variaciones en la dosis o la expresión de C4A se han relacionado con cambios en la actividad del complemento y se asocian con desregulación inmunitaria, incluida la susceptibilidad a fenotipos autoinmunes y procesos neuroinflamatorios. Como nodo funcional dentro de la cascada del complemento, C4A se estudia ampliamente en modelos de defensa del huésped, inflamación tisular y remodelado asociado a sinapsis o mielina.

C4a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de C4A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

C4a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus C4A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional C4A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de C4a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo C4A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de C4a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía C4a en células tumorales con expresión de C4A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.