Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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C23 (Nucleolin) Double Nickase Plasmid (h): sc-400191-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das C23 (Nucleolin) Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- C23 (Nucleolin) Double-Nickase-Plasmid (h) und C23 (Nucleolin) Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NCL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: C23: sc-8031
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
C23 (Nucleolin) Double Nickase Plasmid (h) | sc-400191-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C23 (Nucleolin) Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400191-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCL kodiert C23 (Nukleolin), ein reichlich vorhandenes nukleoläres RNA-bindendes Protein, das die Ribosomenbiogenese durch rDNA-Transkription, Prä-rRNA-Prozessierung und den Zusammenbau von Ribonukleoproteinen koordiniert. Über den Nukleolus hinaus ist Nukleolin an der Stabilität von mRNA, der Chromatinorganisation, DNA-Schadensantworten und dem nukleozytoplasmatischen Transport beteiligt und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die Zellwachstum und Stressanpassung regulieren. Eine veränderte NCL-Expression, -Lokalisation oder posttranslationale Modifikation wurde mit dysregulierter Proliferation, beeinträchtigter Genomstabilität und Veränderungen von Translationsprogrammen in verschiedenen Krankheitskontexten in Verbindung gebracht, darunter Krebs und Neurodegeneration. Als multifunktionelles Gerüstprotein wird C23 umfassend für seine Rolle in der nukleolären Stresssignalgebung und der Regulation des RNA-Stoffwechsels untersucht.
C23 (Nucleolin) Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NCL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NCL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NCL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NCL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.