C1r CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405842

Übersicht

C1R kodiert das Komplementprotein C1r, eine Serinprotease, die zusammen mit C1q und C1s den C1‑Komplex bildet und so den klassischen Komplementweg initiiert. Nach Aktivierung durchläuft C1r eine Autoaktivierung und spaltet C1s, wodurch die Signalkaskade des Komplementsystems weitergeleitet wird, die Opsonierung, die Beseitigung von Immunkomplexen und die Bildung entzündlicher Mediatoren antreibt. Die Aktivität von C1r steht im Zusammenhang mit der Regulation der angeborenen Immunüberwachung sowie dem Crosstalk mit Gerinnungs- und Entzündungswegen im extrazellulären Milieu. Eine Dysregulation von C1R wurde mit veränderten Zuständen der Komplementaktivierung und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, was es für Studien zur Komplementbiologie und zu entzündungsassoziierten Krankheitsmechanismen relevant macht.

Das C1r CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des C1R-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des C1R-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von C1R nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die C1r-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von C1R-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der C1r-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf C1R-Exone abzielen, die für die C1r-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere C1R-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom C1r CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom C1r CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des C1R-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das C1r HDR-Plasmid (h) und C1r HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von C1R-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten C1R-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.