C1QBP CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419387-ACT

C1qbp kodiert C1QBP, ein multifunktionelles, mit Mitochondrien und der Zelloberfläche assoziiertes Protein, das mit der Funktion des mitochondrialen Ribosoms, der Homöostase der oxidativen Phosphorylierung und der Regulation zellulärer Stressantworten in Zusammenhang steht. In Mauszellen wurde C1QBP mit der Kontrolle der Apoptose, der metabolischen Anpassung und der angeborenen Immun-Signalübertragung in Verbindung gebracht – über Interaktionen, die komplementbezogene Prozesse und inflammatorische Signale beeinflussen. Eine Störung der C1QBP-Expression kann den Energiestoffwechsel und den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies umgestalten und dadurch Signalwege beeinflussen, die für Proliferationsfähigkeit und Gewebehomöostase relevant sind. Diese Funktionen machen C1qbp zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung von Mechanismen mitochondrialer Dysfunktion und entzündungsassoziierter Phänotypen in krankheitsrelevanten Modellen.

C1QBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen C1qbp-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

C1QBP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des C1qbp-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der C1qbp-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen C1QBP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native C1qbp-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von C1QBP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des C1QBP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem C1qbp-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.