C1q-A Double Nickase Plasmid (h): sc-402156-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das C1q-A Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- C1q-A Double-Nickase-Plasmid (h) und C1q-A Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf C1QA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: C1q-A: sc-58920
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
C1q-A Double Nickase Plasmid (h) | sc-402156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
C1q-A Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
C1QA kodiert die A‑Kette der Komplementkomponente C1q, eines Erkennungsmoleküls, das den klassischen Komplementweg einleitet, indem es an Immunkomplexe und veränderte körpereigene Strukturen bindet. C1q‑A trägt zusammen mit C1r und C1s zur Bildung des C1‑Komplexes bei und unterstützt dadurch die nachgeschaltete Komplementaktivierung, Opsonisierung sowie die Modulation von Phagozytose und entzündlicher Signalübertragung. Über die angeborene Immunüberwachung hinaus beeinflusst C1q das synaptische Pruning durch Mikroglia, die Beseitigung apoptotischer Zelltrümmer und extrazellulärmatrixassoziierte Reaktionen. Eine veränderte C1QA‑Expression und C1q‑abhängige Signalwege wurden mit Immunfehlregulation und entzündlicher Pathologie in Verbindung gebracht, einschließlich Neuroinflammation und komplementassoziierter Gewebeschädigung, was mechanistische Studien in menschlichen Zellen motiviert.
C1q-A Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des C1QA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von C1QA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die C1QA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit C1QA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.