c-Mpl CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403035

Übersicht

MPL kodiert den Thrombopoietinrezeptor c‑Mpl, einen Zytokinrezeptor vom Typ I, der vorwiegend in hämatopoetischen Stamm‑/Vorläuferzellen sowie in der megakaryozytären Linie exprimiert wird, wo er Selbsterneuerung, Überleben und die Thrombozytenproduktion reguliert. Die Ligandenbindung aktiviert eine JAK2‑abhängige Signalübertragung mit nachgeschalteten STAT‑, PI3K/AKT‑ und MAPK/ERK‑Signalwegen, die Proliferations‑ und Differenzierungsprogramme in der Knochenmarknische koordinieren. Eine fehlregulierte MPL‑Signalgebung und veränderte Rezeptorfunktion sind mit abnormer Megakaryopoese und der Biologie myeloischer Erkrankungen assoziiert, einschließlich Phänotypen, die mit einer aberranten Zytokinantwort und der Homöostase von Stammzellen zusammenhängen. Als linienrestringierter Rezeptor mit klar definierten Signalweg‑Outputs dient c‑Mpl als gut untersuchbarer Ansatzpunkt, um Zytokinsignalgebung, hämatopoetische Schicksalsentscheidungen und rezeptorvermittelte Rückkopplungskontrolle zu analysieren.

Das c-Mpl CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des MPL-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des MPL-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von MPL nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die c-Mpl-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von MPL-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der c-Mpl-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf MPL-Exone abzielen, die für die c-Mpl-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere MPL-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom c-Mpl CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom c-Mpl CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des MPL-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das c-Mpl HDR-Plasmid (h) und c-Mpl HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von MPL-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten MPL-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.