c-Kit Lentiviral Activation Particles (m): sc-421289-LAC

Das Mausgen *Kit* kodiert c-Kit (CD117), eine Rezeptor-Tyrosinkinase der Klasse III, die den Stammzellfaktor (SCF) bindet und dadurch die Erhaltung hämatopoetischer Stamm- und Vorläuferzellen, die Mastzell-Entwicklung, die Melanozytenbiologie sowie das Überleben von Keimzellen reguliert. Die ligandenabhängige Dimerisierung des Rezeptors löst eine Autophosphorylierung aus und aktiviert Signalwege wie PI3K–AKT, RAS–MAPK/ERK, JAK/STAT und SRC-Familien-abhängige Kaskaden, um Proliferation, Migration und Überleben zu koordinieren. Eine fehlregulierte KIT-Signalgebung und veränderte Rezeptorexpression werden in Modellsystemen häufig als mechanistische Ansatzpunkte genutzt, um Linienfestlegung, Gewebehomöostase und onkogene Rezeptor-Tyrosinkinase-Netzwerke zu untersuchen. In der Maus ist *Kit* zudem ein zentraler Marker und funktioneller Knotenpunkt, um das Zusammenspiel zwischen Stroma und Immunsystem sowie die nischenabhängige Regulation des Stammzellverhaltens zu analysieren.

c-Kit Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Kit-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

c-Kit Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Kit-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen c-Kit-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Kit-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.