Plásmido CRISPR de Activación (h) BRCA2: sc-400700-ACT

El gen humano **BRCA2** codifica un supresor tumoral esencial para la reparación de alta fidelidad de roturas de doble cadena del ADN mediante recombinación homóloga, al facilitar la carga de **RAD51** sobre el ADN resecado y estabilizar las horquillas de replicación durante la fase S. BRCA2 actúa dentro de la red de **anemia de Fanconi/BRCA** para resolver los entrecruzamientos interhebra del ADN y coordinar la señalización de puntos de control (checkpoints) a fin de preservar la integridad del genoma. La alteración o la disminución de la actividad de BRCA2 incrementa la inestabilidad cromosómica y eleva la susceptibilidad a la malignidad, lo que lo convierte en un gen central en los estudios de las respuestas al daño del ADN. El estado de BRCA2 también influye en la sensibilidad celular al estrés replicativo y a agentes genotóxicos, respaldando amplias aplicaciones en investigación sobre mantenimiento del genoma y biología del cáncer.

BRCA2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de BRCA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BRCA2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus BRCA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional BRCA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BRCA2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo BRCA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BRCA2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BRCA2 en células tumorales con expresión de BRCA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.