BRCA1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-419362-ACT

Das Mausgen **Brca1** kodiert das Tumorsuppressorprotein **BRCA1**, einen zentralen Regulator der Genomstabilität, der die Reparatur von DNA-Doppelstrangbrüchen, den Schutz von Replikationsgabeln und die Kontrolle von Zellzyklus-Checkpoints koordiniert. BRCA1 wirkt in der homologen Rekombination durch Interaktionen mit Partnern wie **BARD1**, **PALB2** und **RAD51** und moduliert Chromatin- sowie Ubiquitin-Signale an Schadensstellen. In Säugerzellen verknüpft BRCA1 **ATM/ATR**-abhängige DNA-Schadensantworten mit Transkriptions- und Replikationsprogrammen, um Mutagenese zu begrenzen. Die Störung oder veränderte Regulation BRCA1-assoziierter Signalwege wird in der biomedizinischen Forschung breit als Modell eingesetzt, um Mechanismen genomischer Instabilität, Stressantworten und krebsrelevanter Defekte der DNA-Reparatur zu untersuchen.

BRCA1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Brca1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

BRCA1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Brca1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Brca1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen BRCA1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Brca1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von BRCA1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des BRCA1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Brca1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.