Plásmido Doble Nickase (h) BRAP: sc-403847-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)BRAP consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa BRAP (h) y el plásmido de doble nickasa BRAP (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a BRAP. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: BRAP Anticuerpo (D-5): sc-166012
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) BRAP | sc-403847-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) BRAP | sc-403847-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAP (proteína asociada a BRCA1) es una ligasa E3 de ubiquitina citoplasmática que modula la señalización MAPK al unirse y ubiquitinar componentes como KSR1, dando forma a la amplitud y la duración de la vía RAF–MEK–ERK. Mediante el control dependiente de ubiquitina de la estabilidad y el tráfico de proteínas, BRAP influye en la progresión del ciclo celular, la diferenciación y la señalización de respuesta al estrés. Estudios genéticos y funcionales han vinculado la alteración de BRAP con cambios en la señalización proliferativa y una proteostasis desregulada, procesos relevantes para la biología del cáncer y los mecanismos de enfermedad neurovascular. Su papel en la intersección entre la ubiquitinación y la regulación de la vía MAPK convierte a BRAP en un nodo útil para analizar redes de transducción de señales y recambio proteico en células humanas.
BRAP El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus BRAP en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de BRAP. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de BRAP. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con BRAP alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.